分離純化是農(nóng)藥分析必不可少的過程，不管是商品農(nóng)藥樣品還是殘留農(nóng)藥樣品都不是純的農(nóng)藥成分。
對于農(nóng)藥樣品的分析，首先要進行一定的分離純化步驟，使農(nóng)藥和雜質盡可能分離，達到分析結果準確的目的。
不同的農(nóng)藥樣品有不同的純化方法。選擇分離方法的依據(jù)是樣品中農(nóng)藥的性質和雜質的性質差別來選擇分離純化的方法
農(nóng)藥分離的主要類別
原藥分析：各種農(nóng)藥異構體及有效成分含量。
殘留分析：土、水、動植物體中農(nóng)藥殘留量分析。
原藥的一般組成
原藥（固體）：含填料，加工成粉劑，可濕粉劑顆粒時加入。
加入目的：原藥粉，不易粉碎；農(nóng)藥藥效高,單位面積用量少，加入填料后易稀釋。
加入成分：藥石、粘土、碳酸鹽類。
原藥（液體）：含溶劑、助劑、乳化劑、非有效成分（合成副產(chǎn)物、降解成分等）。
原藥分析與殘留分析比較
原藥分析對象：主要對有效成分分析。
原藥分析的特點：含量高，有固定的提純與分析方法。
殘留分析對象：對人、畜、環(huán)境有害成分。
殘留分析特點：殘留量少，組成復雜。要提取、富集，分離提純。分離提純與分析方法靈活多樣。
共同點：基本原理和方法一致。
分離提純（富集）——物理和化學方法；
分析類別：定性分析、定量分析
固體農(nóng)藥的純化方法簡介
固體農(nóng)藥（有效成分）制標準樣時用重結晶法提純。
提純原理：在某一種溶劑中，固體農(nóng)藥的溶解度隨溫度變化有較大的變化。在較高溫度時的飽和溶液趁熱過濾除不溶性雜質。母液放冷，在較低溫度時農(nóng)藥以晶體析出，過濾，可溶性雜質留在母液中而除去。
（可反復重結晶直到提純農(nóng)藥熔點不變?yōu)橹梗?/span>
重結晶的關鍵因素
關鍵：選合適溶劑。
重結晶溶劑具備條件：
a.不與被提純成分發(fā)生化學反應
b.被提純物與雜質要有顯著溶解度差
c.被提純物在該溶劑中溶解度隨溫度變化變化大
d.溶劑沸點適中（不高也不低）
如沒有合適的純溶劑則用混合溶劑重結晶。
混合溶劑的選擇方法
1、確定兩種溶劑可以互相混溶，而且一種是被提純農(nóng)藥的良好溶劑，一種是不良溶劑。
如乙醇和水；苯和乙醇；丙酮和三氯甲烷等。
2、取0.02g—0.03g樣品溶解于一定量（1mL）的良好溶劑中（試管），然后在不斷搖動下緩慢滴加不良溶劑，直到出現(xiàn)渾濁為止
3、記下不良溶劑的體積，計算得到混合溶劑的組成比例，通過重復試驗進行適當調整
重結晶的一般操作步驟
1、制成飽和熱溶液（接近溶劑的沸點）
2 熱過濾（除不溶雜質）
3、自然冷卻結晶
4、過濾晶體與洗滌。
5、干燥
6、標準品多次重結晶，直到m.p 不變?yōu)橹?/span>
重結晶操作要點
1、制成飽和熱溶液
視被提純物質多少選用適當容積的燒瓶，將被提純物質放入燒瓶，裝好回流裝置。
在不超過溶劑沸點的熱浴溫度下緩慢滴加溶劑，并攪動，使溶質在接近容積沸點時剛好溶解，立刻停止滴加溶劑
記下溶劑的體積與溶質的質量
2 （用保溫漏斗）熱過濾?；蛘邔岬牟际下┒泛蜑V紙用熱溶劑潤濕后減壓過濾
3、結晶：濾液自然冷卻結晶（易揮發(fā)溶劑或者易于吸潮的溶劑應密閉結晶）
如果冷至室溫不結晶，則可以放入晶種或用玻棒擦容器器壁；或放入冰箱進行結晶（注意冰箱溫度應該在溶劑凝固點之上）
4、過濾與洗滌晶體：減壓過濾、用低溫、少量溶劑洗滌
注意：減壓過濾應該在布氏漏斗完全沒有液滴滴下為止
5、干燥
a、低熔點固體、不吸潮物質，可以在空氣中干燥
b、高熔點, 熱穩(wěn)定的物質用烘箱中干燥
c、熱不穩(wěn)定，或吸潮、空氣中不穩(wěn)定的物質，低于m.p 20—30℃ ，真空干燥
液體農(nóng)藥 分離提純方法
1、蒸餾法
1）原理：依液體混合物中各組分沸點不同而分離。
2）蒸餾方法分類：
常壓蒸餾適用于b.p較低，在b.p時不分解的物質。
減壓蒸餾適用于b.p較高，或在b.p發(fā)生分解的物質。
水蒸氣蒸餾適用于不與水反應，b.p較高的物質。
2、柱層析法
1）原理：當混合物被束縛在色譜柱的固定相上后，流動相自上而下流經(jīng)固定相，帶動被分離組分向下移動。與固定相作用力大的組分在流動過程中留在了后面，與固定相作用力小的組分在流動過程中跑在了前面，混合物因而被分離。
2）柱層析分類：吸附、分配、凝膠
吸附色譜柱：吸附劑固體表面吸附各種成分
分配色譜柱：惰性載體表面涂高沸點液體，被分離物在淋洗劑與高沸點液體之間溶解分配
凝膠色譜柱：多凝膠填粒、淋洗，凝膠網(wǎng)眼大小篩分不同尺寸的分子
3）柱色譜的幾種技術指標：
a.直徑與長度比：1：10~1：40（短而粗的柱子，分離快，分離效果差；長而細的柱子，分離慢，分離效果好。）
b.色譜柱的分離效果還與吸附劑和洗脫劑的選擇、柱子的裝填質量有關。
3、薄層色譜法
1）薄層色譜是比柱色譜更加應用廣泛的分離分析手段。薄層色譜用于分離提純具有簡單快速的特點，但是其分離容量不及柱色譜大，分離效果也不及柱色譜好。
2）薄層分類：吸附與分配色譜
分配色譜又分正相色譜與反相色譜。
正相：含水吸附劑（固定相），弱極性流動相，極性小的移動快。
反相：鈍化吸附劑（固定相），強極性流動相，極性強的移動快。
4、掃集共蒸餾法
1）原理：將試樣用注射器注入事先填入的無吸附性的填充劑（玻璃棉、玻璃珠、海砂等）的凈化柱內，在規(guī)定溫度下，農(nóng)藥和溶劑蒸汽隨氮氣流進冷凝管，冷凝后進入接收器。脂肪、色素不能汽化的雜質沉積在柱內填充劑上，使雜質得以分離。
本法可用于有機磷、有機氮農(nóng)藥的分離提純。
2）構成部件：柱溫箱、溫度控制器、載氣流量控制器、自動淋洗裝置、凈化柱、冷凝管、冷阱、收集器。
5、低溫冷凍分離法
1）食品中農(nóng)藥殘留的分析，取樣后殘留農(nóng)藥與大量的脂肪、蠟質混合在一起，給分離造成困難。
2）由于動植物組織中的脂肪、蠟質可以在低溫下于丙酮溶液中生成沉淀，將樣品用丙酮反復萃取，萃取液經(jīng)過冷凍，過濾而分離掉脂肪、蠟質沉淀，而農(nóng)藥留在丙酮中。
3）冷凍溫度一般在-70℃
6、液相萃取法
1）原理：一組互不相溶的溶劑中溶有某一成分溶質。這種溶質以一定比例（濃度比）在兩相中分配。兩相中分配比稱分配系數(shù)。利用同組溶劑中各物質分配系數(shù)不同或同種物質在不同溶劑組中分配系數(shù)不同而分開。（選擇合適溶劑，反復分配）
2）適用農(nóng)藥種類
a.用此法一次性回收率達60—100%的含氯農(nóng)藥有：2，4—滴甲酯劑，艾氏劑、甲體六六六、乙體六六六、丙體六六六、丁體六六六、硫丹、異狄氏劑、七氯、氯殺螨、丙菌清、P，P`—滴滴滴、 P，P`—滴滴E、O， P`—滴滴銻、三氯殺螨醇、狄氏劑、環(huán)氧七氯、六氯苯、碳氫靈、甲氧滴滴銻
b.用上法回收的有機磷農(nóng)藥有：谷硫磷、三硫磷、地亞農(nóng)、氮線磷、乙拌磷、殺蟲螟松、亞胺硫磷、馬拉硫磷、甲基一六零五、一六零五、三九一一、磷胺、皮蠅硫磷
7、化學凈化法
1)殘留農(nóng)藥提取液干擾分析成分很大程度是脂肪與色素?；瘜W凈化法是使雜質與某種試劑發(fā)生化學反應除掉或者消擾。
2)最常用的化學凈化法是用酸處理對酸穩(wěn)定的農(nóng)藥或用堿處理對堿穩(wěn)定的農(nóng)藥來除雜。
酸凈化：用濃H2SO4或濃H2SO4與發(fā)煙硫酸（1：1）混合液在分液漏斗中處理萃取液，可以除脂肪、色素。
除雜原理：不飽和脂肪，色素中含有C=C，可以和濃H2SO4加成生，成可溶于濃H2SO4的化合物而除去。
堿凈化：用石油醚淋洗，而耐堿農(nóng)藥有很好的回收率。對艾氏劑、狄氏劑、異狄氏劑宜用堿凈化。
